上海免疫共沉淀（Co-IP）

Co-IP是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)功能的實驗方法。Co-IP是在IP的基礎(chǔ)上衍生出來的實驗方法，是證明蛋白相互作用的金標(biāo)準(zhǔn)。通過檢測免疫沉淀下來的蛋白復(fù)合物來證實中是否存在與X蛋白相互作用的Y蛋白。其基本原理是，在細(xì)胞裂解液中加入抗X蛋白的抗體，孵育后再加入與抗體FC片段特異結(jié)合的Protein A/G-瓊脂糖微珠，若細(xì)胞中有與Y結(jié)合的X蛋白，就可以形成這樣一種復(fù)合物： Y—X—抗X抗體—Protein A或G ，經(jīng)變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，復(fù)合物又被分開。然后經(jīng)免疫印跡或質(zhì)譜檢測目的蛋白。這種方法得到的目的蛋白是在細(xì)胞內(nèi)與興趣蛋白天然結(jié)合的，符合體內(nèi)實際情況，得到的結(jié)果可信度高。

上海免疫共沉淀（Co-IP）
客戶需要注意的是Co-IP方法可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用；同時如果檢測到有相互作用并不能完整表明生理狀態(tài)下共定位，此外檢測到的兩種蛋白質(zhì)的結(jié)合可能不是直接結(jié)合，而可能有第三者在中間起橋梁作用；后在實驗前預(yù)測目的蛋白是什么，以選擇后檢測的抗體，所以，若預(yù)測不正確，實驗就得不到結(jié)果，方法本身具有風(fēng)險,另外客戶可以選擇Co-IP得到的樣品利用質(zhì)譜進(jìn)行后續(xù)分析.

服務(wù)內(nèi)容和流程：
1）用其特定蛋白的抗體與ProteinA/G相結(jié)合(Flag IP Kit已結(jié)合上)；
2）用抗體成點特定蛋白，特定蛋白已結(jié)合了與其相互作用蛋白；
3）通過洗滌得到純復(fù)合蛋白后用感興趣蛋白抗體通過WB方法檢測其IP結(jié)果；
4）提交WB圖與分析結(jié)果和實驗報告。
您只需提供：
表達(dá)待研究蛋白的細(xì)胞以及相關(guān)的抗體。
我們提供：
完整的免疫共沉淀實驗報告單。電子版掃膜結(jié)果及灰度值分析。